Co je HPLC

Co je HPLC?

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je v podstatě velmi Vylepšená forma kolonovou chromatografii. Místo rozpouštědlem

se nechá okapat kolonou odtéct, to je protlačován skrz pod vysokým tlakem až 400 atmosfér. Díky tomu

mnohem rychleji.


To také umožňuje používat velmi mnohem menší velikosti částic pro sloupec, obalového materiálu, který dává mnohem větší plochu

interakce mezi stacionární fáze a molekuly vznášející se kolem ní. To umožňuje mnohem lepší oddělení

součástí směsi.


Jiné významné zlepšení oproti kolonovou chromatografii se týká metody detekce, které lze použít. Tyto metody

jsou vysoce automatizovaná a mimořádně citlivý.



Sloupec a rozpouštědlo


Pozor Existují dvě varianty používané v HPLC podle relativní polarita rozpouštědla a stacionární fáze.


Normální fáze pro HPLC


To je v podstatě stejně jako budete již mít číst o chromatografii na tenké vrstvě nebo kolonovou chromatografii.

Přestože je popisován jako andquot; normalandquot; to isnand #39; t nejčastěji používané formě HPLC.


Sloupec je naplněn malé křemene a rozpouštědlo je nepolární - hexan, například. Typický sloupec má vnitřní

průměr 4,6 mm (a může být menší než) a o délce 150 až 250 mm.


Polární sloučeniny ve směsi předávaný kapilární kolonou se bude držet déle polární křemene než non polární sloučeniny

bude. Nepolární ty bude proto kolonou nechte projít rychleji.


HPLC s obrácenými fázemi


V tomto případě sloupec velikost je stejná, ale oxidu křemičitého je upraven tak, aby usnadňují nepolární připojením dlouhé uhlovodíkové řetězce k jeho

povrch - obvykle s 8 nebo 18 atomy uhlíku v nich. Polární rozpouštědlo se používá – například směs vody a

alkohol jako methanolu.


V tomto případě bude mít silnou přitažlivost mezi polární rozpouštědlo a polární molekuly ve směsi předávaný prostřednictvím

sloupec. Tam wonand #39; t být tolik přitažlivost mezi uhlovodíkové řetězce připojena k oxidu křemičitého (stacionární fázi) a

polární molekuly v roztoku. Polární molekuly ve směsi proto stráví většinu svého času s rozpouštědlem.


Non polární sloučeniny ve směsi bude mít tendenci podobě atrakcí s uhlovodíkové skupiny kvůli van der Waalsovy

disperzní síly. Budou také méně rozpustný v rozpouštědle kvůli potřebě rozbít vodíkové vazby, jak zmáčknout v

mezi vodou nebo methanol molekuly, například. Proto tráví méně času v roztoku v rozpouštědle a zpomaluje

je na jejich cestě přes sloupce.


To znamená, že teď je to polární molekuly, které bude cestovat kapilární kolonou rychleji.